化學(xué)檢驗(yàn)

(一)血液檢查　紅細(xì)胞和血紅蛋白增高 ，白細(xì)胞計(jì)數(shù)10～20×109/L(1萬(wàn)～2萬(wàn)/mm3)或更高，中性粒細(xì)胞及大單核細(xì)胞增多。血清鉀、鈉、氯化物和碳酸鹽降低，血pH下降，尿素氮增加。治療前由于細(xì)胞內(nèi)鉀離子外移，血清鉀可在正常范圍內(nèi)，當(dāng)酸中毒糾正后，鉀離子移入細(xì)胞內(nèi)而出現(xiàn)低鉀血癥。

(二)尿檢查　少數(shù)病人尿中可有蛋白、紅白細(xì)胞及管型。

(三)病原菌檢查

1.常規(guī)鏡檢　可見粘液和少許紅、白細(xì)胞。

2.涂片染色　取糞便或早期培養(yǎng)物涂片作革蘭染色鏡檢，可見革蘭陰性稍彎曲的弧菌。

3.懸滴檢查　將新鮮糞便作懸滴或暗視野顯微鏡檢，可見運(yùn)動(dòng)活潑呈穿梭狀的弧菌。

4.制動(dòng)試驗(yàn)　取急性期病人的水樣糞便或堿性胨水增菌培養(yǎng)6小時(shí)左右的表層生長(zhǎng)物，先作暗視野顯微鏡檢，觀察動(dòng)力。如有穿梭樣運(yùn)動(dòng)物時(shí)，則加入01群多價(jià)血清一滴，若是01群霍亂弧菌，由于抗原抗體作用，則凝集成塊，弧菌運(yùn)動(dòng)即停止。如加01群血清后，不能制止運(yùn)動(dòng)，應(yīng)再用0139血清重作試驗(yàn)。

5.增菌培養(yǎng)　所有懷疑霍亂患者糞便，除作顯微鏡檢外，均應(yīng)作增菌培養(yǎng)。糞便留取應(yīng)在使用抗菌藥物之前，且應(yīng)盡快送到實(shí)驗(yàn)室作培養(yǎng)。增菌培養(yǎng)基一般用pH8.4的堿性蛋白胨水，36～37℃培養(yǎng)6～8小時(shí)后表面能形成菌膜。此時(shí)應(yīng)進(jìn)一步作分離培養(yǎng)，并進(jìn)行動(dòng)力觀察和制動(dòng)試驗(yàn)，這將有助于提高檢出率和早期診斷。

6.分離培養(yǎng)　常用慶大霉素瓊脂平皿或堿性瓊脂平板。前者為強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基，36～37℃培養(yǎng)8～10小時(shí)霍亂弧菌即可長(zhǎng)成小菌落。后者則需培養(yǎng)10～20小時(shí)。選擇可疑或典型菌落，應(yīng)用霍亂弧菌“0”抗原的抗血清作玻片凝集試驗(yàn)，若陽(yáng)性即可出報(bào)告。近年來(lái)國(guó)外亦有應(yīng)用霍亂毒素基因的DNA探針，作菌落雜交，可迅速鑒定出產(chǎn)毒01群霍亂弧菌。

7.PCR檢測(cè)　新近國(guó)外應(yīng)用PCR技術(shù)來(lái)快速診斷霍亂。其中通過(guò)識(shí)別PCR產(chǎn)物中的霍亂弧菌毒素基因亞單位CtxA和毒素協(xié)同菌毛基因(TcpA)來(lái)區(qū)別霍亂菌株和非霍亂弧菌。然后根據(jù)TcpA基因的不同DNA序列來(lái)區(qū)別古典生物型和埃爾托生物型霍亂弧菌。4小時(shí)內(nèi)可獲結(jié)果，據(jù)稱能檢出每ml堿性蛋白胨水中10條以下霍亂弧菌。

8.鑒別試驗(yàn)　古典生物型、埃爾托生物型和0139型霍亂弧菌的鑒別。

實(shí)驗(yàn)室檢查

常規(guī) 項(xiàng)目

(一)血常規(guī)及生化檢查

Wbc↑N↑Rbc↑Na+↓k+↓cl-HCO-3↓Bun↑c(diǎn)r↑

(二)尿常規(guī) 鏡檢 少許Rbc WBC Pro 管型

(三)糞便檢查

1、常規(guī)檢查 黏液 少許Rbc Wbc

2、涂片染色 革蘭氏陰性彎曲弧菌

3、懸滴檢查 運(yùn)動(dòng)活潑呈穿梭壯的弧菌

4、制動(dòng)試驗(yàn) 堿性胨水 6H 生長(zhǎng)物

5、增菌培養(yǎng)PH8.4堿性蛋白胨水 36~37℃6 ~8H→ 菌膜→動(dòng)力 制動(dòng) 分離培養(yǎng)

6、分離培養(yǎng) O抗原的抗血清作玻片凝集試驗(yàn)

(四)血清免疫學(xué)檢查 抗菌抗體 抗腸毒素抗體 抗凝集素

抗體 雙 份血清滴度4倍以上升高

1、菌株的常規(guī)鑒定

對(duì)獲得的所有霍亂弧菌菌株均必須由各級(jí)疾病預(yù)防控制中心進(jìn)行O1或O139群血清學(xué)分群(型);以縣(區(qū)、市)為單位的首發(fā)病例的菌株必須進(jìn)行系統(tǒng)的生化鑒定、試管凝集試驗(yàn)、生物學(xué)分型、噬菌體-生物分型、藥敏試驗(yàn)等項(xiàng)目;其余菌株的鑒定項(xiàng)目由各省疾病預(yù)防控制中心按實(shí)際情況確定。

2、霍亂毒素基因檢測(cè)

各省疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)全部菌株的毒素基因(CT)檢測(cè)(按《霍亂防治手冊(cè)》第五版第82 頁(yè)的引物序列及PCR 擴(kuò)增方法)，不具備檢測(cè)條件的省疾病預(yù)防控制中心可送國(guó)家疾病預(yù)防控制中心檢測(cè)。

3、菌株脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)分析

PFGE 的檢測(cè)工作由國(guó)家疾病預(yù)防控制中心或有條件的省疾病預(yù)防控制中心按PulseNet China 要求的標(biāo)準(zhǔn)方法完成。疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)選擇代表性菌株開展菌株的PFGE 分析。各省疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室對(duì)當(dāng)年菌株的分離和分析情況，按“霍亂菌株實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果匯總表”的項(xiàng)目進(jìn)行匯總，按年逐級(jí)上報(bào)。

4、檢查

(1)直接鏡檢：

①直接涂片染色：將標(biāo)本涂片，固定后用1∶10稀釋石炭酸復(fù)紅染色和革蘭氏染色，鏡檢有無(wú)典型弧菌。典型霍亂弧菌互相連接平行排列，有如“魚群”。

②懸滴標(biāo)本：將標(biāo)本制成懸滴，鏡檢細(xì)菌動(dòng)力，最好用暗視野顯微鏡。霍亂弧菌運(yùn)動(dòng)活潑，呈小魚穿梭狀。

(2)分離培養(yǎng)：將吐瀉物直接或先經(jīng)堿性胨水增菌后，接種于慶大霉素瓊脂等培養(yǎng)基，容易檢出霍亂弧菌。應(yīng)用熒光抗體檢測(cè)糞便中霍亂弧菌，可于1～2小時(shí)內(nèi)獲得結(jié)果。

(3)血清學(xué)檢查：可作血清凝集試驗(yàn)。在發(fā)病第1～3日及第10～15日各取1份血清，若第2份血清的抗體效價(jià)比第1份增高4倍或4倍以上，有診斷參考價(jià)值。

(4)制動(dòng)試驗(yàn)——快速診斷：在急性病人的水樣便中含有大量弧菌，如懸滴檢查陽(yáng)性，再滴加不含防腐劑的霍亂多價(jià)血清(使用濃度為1∶64)，幾分鐘內(nèi)細(xì)菌運(yùn)動(dòng)停止，凝集成塊即為陽(yáng)性。

專家提醒

現(xiàn)在人們很少聽到霍亂 病例，不過(guò)該傳染病其實(shí)一直都有零散地發(fā)生，2009年江蘇有兩例零散霍亂報(bào)告，2008年有8例。

據(jù)有關(guān)專家介紹，近十多年來(lái)，江蘇的霍亂疫情一直處于散發(fā)平穩(wěn)狀態(tài)，即使這一次出現(xiàn)了霍亂疫情，也是一個(gè)“孤立事件”，只要嚴(yán)格按照程序，完全可以妥善處置。

專家提醒，霍亂具有發(fā)病急、傳播快、波及面廣的特點(diǎn)。感染霍亂后，有的只有輕微腹瀉或者根本沒有癥狀，有的表現(xiàn)為劇烈的無(wú)痛性水樣腹瀉。感染霍亂后，如果治療不及時(shí)或不恰當(dāng)，會(huì)引起嚴(yán)重脫水導(dǎo)致死亡。一般在6～9月份是流行高峰。對(duì)于霍亂，人群普遍容易感染，胃酸缺乏者尤其易感。[2]

疫情

案例一：2010年9月9日金陵晚報(bào)報(bào)道江蘇出現(xiàn)近年來(lái)首起集體霍亂疫情，淮安一中學(xué)19名學(xué)生確認(rèn)感染霍亂。這是近年來(lái)報(bào)告人數(shù)最多的一起霍亂疫情。江蘇省衛(wèi)生廳通報(bào)中還表示，疫情已得到有效控制。

案例二：2010年10月21日，據(jù)外電報(bào)道,海地衛(wèi)生官員21日表示，已有近140人因不明原因的急性腹瀉傳染病而死亡。2010年10月22日，當(dāng)?shù)匦l(wèi)生官員確定爆發(fā)的急性腹瀉傳染病為霍亂。這次爆發(fā)的疫情是震災(zāi)后最嚴(yán)重的公共衛(wèi)生事件。據(jù)了解當(dāng)?shù)貝毫拥男l(wèi)生條件(尤其是飲水衛(wèi)生條件)是爆發(fā)霍亂的主要原因。11月17日已經(jīng)有超過(guò)1000人死于霍亂?；魜y幾乎蔓延到海地的各個(gè)省份，有超過(guò)16000人目前在醫(yī)院中接受治療。醫(yī)療專家和流行病學(xué)專家此前預(yù)測(cè)稱，海地霍亂疫情蔓延恐將造成20萬(wàn)人感染。他們強(qiáng)調(diào)須加強(qiáng)對(duì)當(dāng)?shù)孛癖娽t(yī)療知識(shí)的普及，使他們能夠及時(shí)尋求治療。

海地的第二大城市海地角有謠傳稱，霍亂是聯(lián)合國(guó)維和部隊(duì)帶來(lái)的，居民受到鼓動(dòng)開始示威。他們臨街縱火，攻擊聯(lián)合國(guó)人員，騷亂已經(jīng)持續(xù)3天，導(dǎo)致至少2人死亡，多人受傷。當(dāng)?shù)氐陌羟驁?chǎng)現(xiàn)在充當(dāng)臨時(shí)醫(yī)院，因?yàn)榻值辣皇就甙哉?，車輛難以通過(guò)，許多病患根本到不了醫(yī)院，耽誤治療。同時(shí)，疫情迅速蔓延，僅17日一晚，就新增了200多名病患。

聯(lián)合國(guó)在海地駐扎了1萬(wàn)多名軍警，聯(lián)合國(guó)已否認(rèn)海地這次霍亂是通過(guò)一名尼泊爾籍軍人從境外帶入海地的說(shuō)法。

報(bào)道稱，西半球上次出現(xiàn)霍亂疫情已是將近20年前的事。當(dāng)時(shí)，從秘魯開始的疫情擴(kuò)散到16個(gè)國(guó)家。從1991年到1997年，秘魯累計(jì)有超過(guò)65萬(wàn)人感染霍亂。

海地持續(xù)一個(gè)多月的霍亂疫情，目前仍處于失控狀態(tài)。截至昨天，全國(guó)10個(gè)省中已有8個(gè)暴發(fā)霍亂，造成至少1200人死亡，近兩萬(wàn)人住院治療。在疫情發(fā)源地海地第二大城市海地角，疫情已遍布城郊各地，過(guò)去一周，每天大約有30到65名患者被送往醫(yī)院，死亡率甚至高達(dá)7.5%。